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1X PBS buffer protocol.pdf

 

 

 

1X PBS

in 800 ml of distilled H2O.

 

8 g ------------------- NaCl

0.2 g ----------------- KCl

1.44 g ---------------- Na2HPO4

0.24 g ---------------- KH2PO4

 

Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add H2O to 1 liter. Sterilize by autoclave.

 

 

 

 

 

10X PBS

 

1.     Dissolve the following in 800ml distilled H2O.

 

80g of NaCl

2.0g of KCl

14.4g of Na2HPO4

2.4g of KH2PO4

 

1.Adjust pH to 7.4.

2.Adjust volume to 1L with additional distilled H2O.

3.Sterilize by autoclaving.

 

 

 

 

 

인산완충식염수 (phosphate buffered saline ; PBS, pH 7.2-7)

PBS phosphate buffer 생물학 관련 실험에서 가장 많이 쓰이는 buffer

Buffer : 완충용액

완충용액은 외부로부터 어느 정도의 또는 염기를 가해도 그것들의 영향을 받지 않고, 수소이온농도를 일정하게 유지하려고 하는 용액

버퍼의 선택기준

l  pKa 값이 6-8사이 정도

l  용액 내에서의 높은 용해성

l  생체막의 투과성

l  염에 의한 영향이 적을

l  농도, 온도, 이온들에 의한 영향이 적을

l  양이온과의 특별한 반응에 대해 알려진 것이 없어나 전혀 없는

l  화학적인 안정성

l  240nm-700nm 빛에 대해 흡광이 되지 않을

l  순도를 높게 얻을 있는

 

 

 

 

PBS buffer 중요한 이유

1)   이온세기를 맞추어 주기 때문에

우리 몸은 일정농도의 이온농도를 가지고 있습니다. 이온 농도가 너무

높거나 낮을 경우에는 우리 몸의 세포가 삼투막으로 되어 있기 때문에 지나친 물의 흐름이 생겨 세포가 수축하거나 (외부이온농도가 높은 경우) 팽창하여 (외부 이온농도가 낮은 경우) 세포가 파괴될 위험이 있습니다. 우리가 흔히 생리식염수라고 하는 것은 0.9% 소금을 녹인 수용액으로 위와 같은 이온농도를 유지하기 위한 것입니다.

2)   완충용액으로의 작용

인산완충용액의 기능을 더한 . 이러한 완충용약은 우리 몸에서 급격한 pH 변화를 조절해 줍니다. 급격한 pH변화는 여러가지 부분에서 영향을 주지만 대표적으로 단백질 (효소) 기능이 이러한 pH변화에 민감한 것을 이유로 꼽을 있습니다.

 

따라서 이름도 PBS, phosphate buffered saline 인산 완충용액 + 생리식염수 의미인 것입니다.

 

우리 몸의 이온은 NaCl 대표적이지만 KCL 그다음으로 중요한 이온입니다. 따라서 일정비율로 NaCl만이 아니라 KCL 일부 넣어줍니다.

인산완충용액은 Monobasic phosphate Dibasic phosphate 넣어주어야만 완충용액으로서 기능을 합니다. 따라서 먼저 넣어준 양이온에 맞추어 Na2HPO4 10mM, KH2PO4 2mM 넣어주는 것입니다.

 

 

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