생명공학 전공자라면 누구나 접하는 실험방법 중의 하나
누구나 읽으면 이해가 될거라고 스스로 생각하면서 적는 나의 실험방법
디테일을 요구한다면 정중히 거절..ㅋ(구글은 정보의 바다, 궁금한건 구글에서 해답을 찾으시옹~!)
다만 의견수렴 가능 -> 수정해야 할 부분 지적하면 과감히! 판단 후 수정할 의향 120%
(but, 실험실마다 실험 방법이 조금씩, 미세하게, 디테일하게 다르므로 그 다름을 인정해주기 바람)
아주 얕은 지식이지만 나눔을 실천하고 싶은 실험실 좀비가...
Materials and Methods
#1. Cell culture
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Media (10% FBS in media, welgene), 1 X PBS, pipet, pipet aid, cleanbench, tip(1000ul, 200ul, 10ul), trypsin(welgene), 15ml tube or 50ml tube(SPL), dish(Nunc) |
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1 FBS 와 Media를 thermostat (37도) 에 넣어서 미리 heat (약 20분)
2 Cleanbench ON (UV off, light ON, Fan turn on), 필요한 멸균된 pipet이나 tip등이 충분한지 확인하고 미리 cleanbench안에 넣어둔다
3 Cleanbench를 70% EtOH 묻힌 티슈로 잘 닦는다
4 주변 정리(FBS, Media 등 화염멸균 후 Cleanbench안에 넣기)
5 alcohol lamp에 불 붙이기
6 CO2 incubator에서 dish 꺼내어 cell을 현미경으로 관찰
7 cell에 이상이 없으면 현미경 스위치를 끈 후 dish를 클린벤치로 가져간다
8 포셋을 이용해 tip을 꺼내어 suction기에 끼운 후 dish안에 있는 media suction
9 media가 완전히 suction되면 tip은 빼서 버리고 suction기 전원 off.
10 pipet aid 이용해 1X PBS 5ml를 dish 에 넣고(cell이 떨어지지 않도록 가장자리로 PBS를 넣어준다) 골고루 handling 해 준 후 다시 suction (dead cell, serum 등이 남아있지 않도록 wash)
11 Dish에 trypsin 0.5ml 넣고 5% CO2 incubator 2~3min
12 cell이 바닥에서 떨어졌는지 현미경으로 확인(2~3분 후)
13 1X PBS 10ml 넣고 pipeting으로 cell을 떼어내 준 후 15ml tube에 담는다
14 15ml tube centrifuge 1200RPM, 3min
15 centriguge 하는 시간 동안 new dish 에 labeling(name, date, cell line name, passage...)
16 tube가져와서 supernatant throw out, new media 10ml넣고 pipeting 17 cell count 18 원하는 양만큼 new dish에 cell seeding 19 혹은 실험해야 하는 거라면 원하는 cell 수로 원하는 plate에 cell seeding
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[ 참고 문헌 ]
cell 실험을 할 땐 항상 라텍스를 끼고 contamination이 되지 않도록 유의하면서 조심스럽게 실험해야한다
물론 cell 을 항상 조심스럽게 다뤄야 하고, culture 할 때 자극을 많이 주지 않는 것이 결과에 영향을 미치지 않는 방법이다.
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